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ELISA試驗(yàn)比色測(cè)定關(guān)鍵點(diǎn)解析
一、顯色反應(yīng)控制
顯色時(shí)間?
終止反應(yīng)后需在15分鐘內(nèi)完成比色,避免顯色產(chǎn)物降解導(dǎo)致OD值漂移?。
顯色劑(如TMB)避光保存,避免光照失效?。
波長(zhǎng)選擇?
常規(guī)檢測(cè)波長(zhǎng)450nm(TMB底物),若使用OPD底物則選492nm?。
雙波長(zhǎng)檢測(cè)(如450nm/630nm)可減少微孔板邊緣效應(yīng)干擾?。
二、儀器校準(zhǔn)與操作
酶標(biāo)儀校準(zhǔn)?
開機(jī)預(yù)熱30分鐘,使用標(biāo)準(zhǔn)濾光片校準(zhǔn)波長(zhǎng)準(zhǔn)確性?。
空白孔調(diào)零時(shí)需確保無(wú)氣泡殘留,避免光路誤差?。
加樣精度?
槍頭懸空加樣至孔底,避免觸碰孔壁或液體飛濺?。
顯色劑與終止液需按說(shuō)明書體積精確加入(如50μL/孔)?。
三、數(shù)據(jù)可靠性保障
重復(fù)性控制?
標(biāo)準(zhǔn)品與樣本均需設(shè)置復(fù)孔(建議2-3孔),CV%應(yīng)<15%?。
手工洗板時(shí)拍干力度需均勻,避免殘留液體影響OD值?。
異常值處理?
邊緣孔OD值偏高時(shí),建議將質(zhì)控孔置于板中央?。
顯色異常(如白板/高背景)需排查試劑活性或封閉條件?。
四、常見問(wèn)題解決方案
假陽(yáng)性?:溶血樣本需離心去除,類風(fēng)濕因子干擾可添加阻斷劑?。
假陰性?:避免反復(fù)凍融樣本,競(jìng)爭(zhēng)法需嚴(yán)格按順序加樣?。
注:僅供科研使用,以上資料供參考,如需具體產(chǎn)品說(shuō)明請(qǐng)咨詢技術(shù)老師或品牌供應(yīng)商。
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