ELISA實驗過程中出現(xiàn)溢值的原因分析

以下是天津本生對ELISA實驗中出現(xiàn)溢值(OD值超出檢測范圍)的常見原因及解決方案：

一、樣本與標準品問題

稀釋錯誤‌

樣本或標準品未按說明書要求稀釋，濃度過高導致信號過強。

解決‌：嚴格遵循稀釋比例，使用試劑盒配套稀釋液。

樣本污染‌

樣本混入雜質(如溶血、細菌污染)或交叉污染，引發(fā)非特異性反應。

解決‌：離心處理樣本，避免重復使用吸頭，操作時分區(qū)處理樣本。

　　二、實驗操作因素

孵育條件不當‌

溫度過高或時間過長，加速抗原抗體結合及底物顯色。

解決‌：校準孵育箱溫度，使用計時器控制時間。

未覆蓋酶標板‌

孵育時未蓋板導致液體蒸發(fā)，局部濃度升高。

解決‌：每次孵育均使用配套封板膜。

顯色時間過長‌

TMB底物顯色超過說明書建議時間，OD值異常升高。

解決‌：顯色后密切觀察，及時終止反應。

三、試劑與設備問題

偶聯(lián)試劑濃度過高‌

HRP標記抗體或鏈霉親和素未正確稀釋，信號放大過度。

解決‌：按說明書現(xiàn)配現(xiàn)用，避免濃縮液直接使用。

檢測波長錯誤‌

酶標儀波長設置與底物要求不匹配(如TMB應為450nm)。

解決‌：校準儀器，核對說明書波長參數(shù)。

洗滌不充分‌

未結合的試劑殘留導致背景升高，間接引發(fā)溢值。

解決‌：增加洗滌次數(shù)(3-5次)，拍干孔內(nèi)液體。

四、其他注意事項

避免使用錯誤稀釋液‌：僅使用試劑盒內(nèi)配套稀釋液。

分裝試劑‌：避免反復凍融導致活性異常。

質控對照‌：設置陰陽性對照，監(jiān)控實驗系統(tǒng)穩(wěn)定性。

通過排查上述環(huán)節(jié)并規(guī)范操作，可有效減少溢值現(xiàn)象。

注：以上資料僅供參考，不作為實驗依據(jù)，具體請咨詢技術老師或產(chǎn)品品牌供應商。

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